ПЦР-мутагенез Мутагенез — процесс внесения мутаций в молекулы ДНК. Мутагенез используется для исследования функций последовательностей, закодированных в ДНК (например, выяснения функций генов). С ПЦР можно быстро вводить мутации в заданные позиции молекул ДНК в пробирке.

В простейшем случае мутация вносится в один из праймеров для ПЦР. Такой праймер будет лишь частично комплементарен матрице, но одиночная нуклеотидная замена, как правило, не снижает значительно эффективность амплификации. Поскольку в реакцию добавляется избыток праймеров, после ПЦР большая часть молекул будет содержать нужную мутацию.

Более сложный подход применяется для введения мутаций не в края ПЦР-продукта, а в середину. Для этого ставится два раунда ПЦР, и такой метод называется ПЦР с мегапраймерами. В первом раунде проводится ПЦР с одним внешним праймером и внутренним праймером с мутацией. Получается ПЦР продукт, который содержит только часть целевой молекулы ДНК. Далее проводится второй раунд амплификации с использованием этого ПЦР-продукта в качестве прямого праймера (мегапраймер), и второго (внешнего) праймера в качестве обратного праймера.

abcdefgh    1   06.03.2021 17:42    0